谷胱甘肽S-转移酶试剂盒产品说明书

【资料简介】

谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）试剂盒
分光光度法
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加5 mL 蒸馏水溶解。

产品说明：
GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统
的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变
为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外
的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因
为GST 具有GSH-Px 活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质
等的功能。注意，GST 催化的反应减少GSH 含量，但是不增加GSSG 含量。
GST 催化GSH 与CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm 波长
处吸光度上升速率，即可计算出GST 活性。

自备仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入
1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500
万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间
3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。

二、测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。
3. 空白管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 试剂一，900μL 试剂二和100μL 试剂三，迅速混匀后
于340nm 测定吸光度变化，记录10 s 和310 s 吸光度为A1 和A2。
4. 测定管：取1mL 石英比色皿，加入100μL 上清液，900μL 试剂二和100μL 试剂三，迅速混匀后
于340nm 测定吸光度变化，记录10 s 和310 s 吸光度为A3 和A4。

注意：空白管只需测定一次。

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；
2. 细胞中GST 活性测定时，细胞数目须在300 万-500 万之间，细胞中GST 的提取时可加试剂一
后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；
3. 本法测定GST 活性的线性范围可达76 μmol/min /L，测定前先用1～2 个样做预实验，如5min
内反应不成线性，须对样品用蒸馏水稀释，计算结果乘以稀释倍数；
4. 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。