提取动物组织DNA的方法

【资料简介】

提取动物组织DNA的方法

 

【实验步骤】
1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，剪小放入2.0ml离心管中，用FM-200P研磨45秒；
2．加入0.45ml TES混匀，再加入50ul SDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。
3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。
4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5/2.0ml离心管中;
5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5/2.0ml离心管;
6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。
7．12000 r/m，离心10分钟，弃乙醇;
8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000 r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA;
9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用;

【注意事项】
1．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA的损伤。
2．取上层清液时，注意不要吸起中间的蛋白质层。
3．乙醇漂洗去乙醇时，不要荡起DNA。
4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。