IHC实验抗原修复的质量控制

【资料简介】

正面临标准化、量化的挑战。例如肿瘤各种预后标记物的IHC检测结果的评估，越来越需要进行表达间差异的定量分析，对肿瘤病人预后作出客观、准确的判定。欲实现这一目标，必须对IHC的每一步进行标准化，才能保证对IHC的质量控制。作者认为，在整个IHC过程中，目前zui大的困难是IHC的抗原修复，也是影响IHCzui终结果的zui不稳定因素，各个实验室都有自己*的方法，远没有达到初步的共识。欲实现IHC的质量控制，必须对AR进行质量控制，可以考虑从如下几个方面进行。

首先，要想获得一个满意、可靠的IHC抗原修复的结果，必须对获得结果的可靠性作出准确的评估，同时为证实结果是否可靠，必须结合该抗体的生物学特征，检查标本的临床资料，以及其他实验获得的结果，例如Western印迹、ISH等分子生物学方法和各种对照结果进行分析比较，制定一个合理、科学的抗原修复方法。

其次，每个从事IHC工作的人员（包括技术员和医生）要了解被检测抗原在组织细胞内的定位，这一点是很重要的，据此不但可以明确IHC染色结果是否可靠，而且可以调整抗原修复的方法和力度。许多的开拓性研究对蛋白质的定位是一种很重要的依据，可以根据形态学特点、生物学性质和其他相关领域的知识来确定定位的准确性。为了达到上述目的，对所检测抗原性质的了解也很重要，例如活细胞系、新鲜组织和甲醛固定的石蜡包埋的细胞和组织的可比系统，再加上所掌握的蛋白质的生物学特性，就可以获得比较的定位，据此判断经抗原修复后其蛋白质定位的可靠性和真实性。

IHC的定位，不但对于临床病理的辅助诊断、肿瘤预后的评估和指导治疗具有十分重要的作用，而且对于科学研究也相当重要。zui近有些应该出现在核内表达的抗原，在有些检测结果中频繁出现在细胞浆内，例如p73、p16、p21war、p33lNGl、存活蛋白（sur—vivin）和细胞周期素等，根据实验室经验和所掌握的这些抗原的生物学特征，首先应该考虑是否是抗原修复这一环节出了问题，其次是否是抗体的质量有问题。

根据各自抗体的生物学特点不同，在检测甲醛固定的石蜡切片时，应该制定一个*的抗原修复方案，具体原则如下：

①、首先要明确不是所有的抗原检测都需用抗原修复；

②、不是所有的由甲醛固定引起的抗原结构改变都适合于常规AR，应该在调查研究的前提下制定一个*的抗原修复流程；

③、对于少量蛋白，用高温（煮沸）不能检测到IHC阳性结果，可采用较低温度的热处理，或与其他抗原暴露的方法相结合，例如热修复和酶消化、热修复和细胞穿透剂、两种不同的修复介质或与高敏感的IHC方法相结合，以获得*的染色结果。

原文地址:/biotech/Immunity/2011/g818582732