小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3elisa试剂盒操作方法和结果计算与判断

【资料简介】

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3elisa试剂盒  操作方法

1. 实验前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温（20-25℃）；

2. 取出所需数量的板条，其余密封放回 4℃；

3. 建立标准曲线：设标准孔 8 孔，每孔中各加入样品稀释液 100ul，孔加标准品 100nl，混匀后用加样器吸出 100ul，移至第二孔。如此反复对倍稀释至第七孔，后，从第七孔中吸出 100ul 弃去，使之体积均为 100ul。第八孔为空白对照；

4. 加样：待测品孔中每孔加入待测样品 100ul；

5. 将反应板置 37℃120 分钟；

6. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干;

7. 每孔中加入抗体工作液 50ul;

8. 将反应板充分混匀后置 37℃60 分钟。

9. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干;

10. 每孔加酶标抗体工作液 100uL. 11. 将反应板置 37℃60 分钟。

12. 洗板：同前。

13. 每孔加入底物液 100uL，置 37℃暗处反应 5-10 分钟。

14. 每孔加入 50uL 终止液混匀。

15. 在 450nm 处测吸光值。（应尽快，时间过长可能导致本底偏高）

结果计算与判断：

1.所有 OD 值都应减除空白值后再计算；

2.以标准品 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/ml 之 OD 值在半对数纸上作图，画出标准曲线，将浓度作为 X 轴（对数轴），OD 值作为 Y 轴（线性轴）。曲线应为一光滑曲线。

3.根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应IGFBP7含量。