猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒实验原理

【资料简介】

猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中猪圆环病毒抗原（PCV Ag）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的圆环病毒抗原（PCV Ag）标准品和未知浓度的圆环病毒抗原（PCV Ag）待检样品，温育后，加入标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的圆环病毒抗原（PCV Ag）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪圆环病毒抗原（PCV Ag）浓度。 

猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书试剂盒组成 

 

猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书标本要求 

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒操作步骤

1.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中加入50微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

3.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。

5.加标记的抗-IgG抗体：每孔加入标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

6.洗涤：操作同4。

7.加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

8.洗涤：操作同4。

9.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

猪圆环病毒抗原（PCV Ag）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

4．如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以稀释倍数（×5×n）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

线性范围：

10ng/L -360ng/L

规格：

96猪份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月