大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J实验结果计数和细胞培养操作步骤

【资料简介】

大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J    实验结果计数：

（1）将血球计数板及盖片擦干净，并将盖片盖在计数板上。

（2）将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。

（3）静置3分钟。

（4）镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的，然后按下式计算：

     细胞数/ml=4大格细胞总数/4*10000

注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液

大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J       细胞培养操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量，使的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。