植物铁氧还蛋白（FDX）酶联免疫试剂盒的实验原理

【资料简介】

植物铁氧还蛋白（FDX）酶联免疫试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物铁氧还蛋白（FDX）水平。用纯化的植物铁氧还蛋白（FDX）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物铁氧还蛋白（FDX），再与HRP标记的铁氧还蛋白（FDX）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物铁氧还蛋白（FDX）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物铁氧还蛋白（FDX）浓度。

组成

30倍浓缩洗涤液20ml×瓶7终止液6ml×瓶

2酶标试剂6ml×瓶8标准品（20ng/L）0.5ml×瓶

3酶标包被板2孔×8条9标准品稀释液.5ml×瓶

4样品稀释液6ml×瓶0说明书份

5显色剂A液6ml×瓶封板膜2张

6显色剂B液6ml×/瓶2密封袋个

标本要求

．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

60ng/L5号标准品50μl的原倍标准品加入50μl标准品稀释液

30ng/L4号标准品50μl的5号标准品加入50μl标准品稀释液

5ng/L3号标准品50μl的4号标准品加入50μl标准品稀释液

7.5ng/L2号标准品50μl的3号标准品加入50μl标准品稀释液

3.75ng/L号标准品50μl的2号标准品加入50μl标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品0μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色0分钟.

0.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后5分钟以内进行。

植物铁氧还蛋白（FDX）酶联免疫试剂盒注意事项

．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡5-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

植物铁氧还蛋白（FDX）酶联免疫试剂盒保存条件及有效期

．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月