Cell Counting Kit-8

【资料简介】

Cell Counting Kit-8
目录号 产品名称 规格 包装
A1210-100 Cell Counting Kit-8 100 T 1ml
A1210-500 Cell Counting Kit-8 500 T 5ml
A1210-1000 Cell Counting Kit-8 1000 T 10ml
A1210-3000 Cell Counting Kit-8 3000 T 30ml
保存：4℃密封避光保存，有效期一年。
产品简介：
Cell Counting Kit-8 简称 CCK-8 试剂盒，为 MTT 法的替代方法，是一种基于 WST（水溶性四唑盐，化学
名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的
快速高灵敏度检测试剂盒。可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验
使用说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。
3、接种后培养至细胞贴壁，然后加 CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横
坐标（X 轴），OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用
此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8 后的培养时间。）
二、细胞活性检测
1、在 96 孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在 37℃,5% CO 2 的条件下）。
2、向每孔加入 10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。
5、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值- 毒性检测
1、在 96 孔板中配置 100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时（在 37 ℃，5% CO2 的条件下）。
2、向培养板加入 10μL 不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或 48 小时）。
3、向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。如果待测物质
有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加
入新的培养基），去掉药物影响。
4、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
5、用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
6、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。
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活力计算：.
细胞活力（％）=[A(加药)－A(空白)]／[A(0 加药)－A(空白)]×100
A（加药）：具有细胞、CCK-8 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和 CCK-8 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药）：具有细胞、CCK-8 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力