ELISA的改进新方法斑点ELISA（dot-ELISA）

【资料简介】

Dot-ELISA是由Hawkes等建立。用吸附蛋白质能力很强的硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将少量抗原（1～2μL）点加于膜上，干燥后经过封闭液处理；滴加待检血清和酶标抗抗体（间接法），或是先在NC膜上滴加待检血清（2～5tzL），干燥后加封闭液处理；滴加特异性抗原和酶标抗体（双抗体夹心法）进行反应。

洗涤后滴加能形成不溶性有色沉淀的底物溶液（HRP常用二氨基联苯胺、4-氯乙萘酚）。阳性反应在膜上出现肉眼可见的着色斑点。Dot-ELISA常用于筛选单克隆抗体杂交瘤细胞；在各种病毒性疾病和寄生虫病的临床诊断与血清流行病学调查中亦广泛使用。

此法具有以下优点：

①特异性强，假阳性较少；

②敏感性高，NC膜对蛋白质的吸附性能优于聚苯乙烯，可检出lng抗腺病毒IgC；检出抗原的敏感性较常规ELISA法高6～8倍；

③试剂用量少，比ELISA法至少节约10倍；

④操作简便快速，不需要特殊设备条件，适合基层单位使用；

⑤抗原膜保存期长，—20％可保存半年，不影响其活性；并可邮寄供现场流行病学调查使用；

⑥检测结果可长期保存，便于复查。