植物吲哚乙酸氧化酶（IAAO）elisa试剂盒使用方法

【资料简介】

植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）elisa试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用

实验原理
植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样本处理要求
.血清：室温血液自然凝固0-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合0-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到00万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）ELISA试剂盒组成注意事项

. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

0. 实验还需要酶标仪（450nm），37℃恒温箱，高精度加样器及枪头：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL以及蒸馏水或去离子水。

. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按：20稀释，即份20×洗涤缓冲液加9份蒸馏水。

3. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

4.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能人上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

5.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）ELISA试剂盒产品优势

. 品种齐全、质量可靠、灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简便、稳定性好。

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