双歧杆菌特定酶的检测

【资料简介】

双歧杆菌特定酶的检测

利用果糖-6-磷酸盐对分离得到的菌种进行果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶（F6PPK）的测定，初步确定菌种是否为双歧杆菌属。F6PPK测定的操作如下：

①将从样品中分离出的双歧杆菌培养于厌氧液体改良MRS培养基中37℃生长24 h。

②将菌液4400 rpm离心10 min,收集菌体，缓冲液ⅰ洗涤2次，zui后溶于约4 mL缓冲液ⅰ中，制成细菌悬液。

缓冲液ⅰ：现用现配。取0.05 M Na2HPO4 31.5 mL和0.05 M NaH2PO468.5 mL,再加500 mg/L半*-盐酸盐。

③用超声波粉碎仪，400 W条件下；每处理5 s、间隔5 s,超声粉碎8 min，至菌体溶液呈半透明。

④破碎后，取0.5 mL于离心管中，加试剂ⅱ和ⅲ各125 µL,37℃保温30 min。

ⅱ6 mg/mL氟化钠加10 mg/mL碘乙酸钠。

ⅲ果糖-6-磷酸盐80 mg/mL水溶液。

⑤加试剂ⅳ0.750mL,室温10 min。

ⅳ现用现配。盐酸羟胺139 mg/mL。酸性*，用氢氧化钠中和至pH6.5。

⑥加试剂ⅴ和ⅵ各500 µL,室温5 min。

⑦加试剂ⅶ500 µL,显色。红褐色或红紫色为阳性，黄色为阴性。

ⅶ0.5 g/100 mL FeCl3·6H2O溶于0.1 MHCl。