游离脂肪酸（FFA）含量试剂盒说明书

【资料简介】

游离脂肪酸（FFA）含量试剂盒（测血清、动物组织、微生物、细胞）

微量法 100 管/96 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异的样本做预测定

测定意义：

游离脂肪酸，也称为非酯化脂肪酸，在与白蛋白结合的血浆中循环。动物血液中的游离脂肪

酸 (FFA )含量是一项重要的生理生化指标。血清中游离脂肪酸的浓度与脂类代谢、糖代谢、

内分泌功能有关，游离脂肪酸的浓度会因为糖尿病、重症肝障碍、功能亢进等疾病而

上升。

测定原理：

用有机溶剂萃取 FFA。含有 FFA 的有机液与三乙醇胺铜反应,在有机相中形成脂肪酸铜 (铜

皂) FFA 一 Cu。Cu 离子与显色液反应形成紫红色络合物。反应形成的颜色深浅与 Cu 离子

浓度的关系符合朗伯一比尔定律，因此可利用此反应进行比色。

自备的仪器和用品：

酶标仪、离心机、可调式移液器、96 孔板、蒸馏水。

试剂的组成和配制：

萃取液：液体 120 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，室温保存；

试剂四：液体 12 mL×1 瓶，4℃保存；

样本前处理：

1.动物组织：按照动物组织质量（g）：萃取液 mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组

织，加入 1mL 萃取液），进行冰浴匀浆。震荡提取 15min，5000 rpm 4℃离心 5min，取有

机相待测。

2.血清：吸取 50 μL 血清样本，加入 1 mL 萃取液，震荡提取 15 min 后，4℃，5000 rpm 离

心 5 min，取有机相待测。

3.微生物、细胞：按照细胞数量（104 个）：萃取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建

议 500 万细胞加入 1 mL 萃取液）加入萃取液，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2

秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；震荡提取 15 min，然后 5000 rpm 4℃离心 5min，取有机相

待测。

注意：有机相待测液可能存在于上层，也可能存在于下层，注意观察，体积较多的那一层

即为有机相待测液。

测定步骤：

1、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550 nm。

2、 工作液的配制：临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：试剂三（m）=1（mL）：

1（mL）：0.66（g）的比例充分混匀。（注意：现用现配，用多少配多少，在空瓶中配

制，试剂盒中带有 4 个空瓶，先将试剂一与试剂二混合，后再加入试剂三粉剂）

3、测定管：吸取600μL样本，加入200μL工作液，盖紧后震荡20 min，4℃，5000 rpm离

心5 min，分层后取200μL上层有机相，加入100μL试剂四，摇匀，10 min后测定550 nm的

吸光值，记为A测定。

4、空白管：吸取600μL萃取液，加入200μL工作液，盖紧后震荡20 min，4℃，5000 rpm离心5 min，分层后取200μL上层有机相，加入100μL试剂四，摇匀，10 min后测定550 nm的

吸光值，记为A空白。

空白管只需测一次。△A=A测定-A空白

注意：1、有机溶剂易挥发，加入96孔板后应尽快检测。

2、测定管中加入的样本即样本前处理中的有机相待测液。

FFA 含量计算：

标准曲线：y = 0.0161x - 0.0141 R2 = 0.9985 x：棕榈酸标准品浓度（nmol/mL）

y：吸光值差值△A

1、血清 FFA 含量计算：

FFA 含量(μmol/mL)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000

=1.242×(△A+0.0141)

2、动物组织、微生物、细胞中 FFA 含量计算：

（1）按样本蛋白浓度计算

FFA 含量(μmol/g 鲜重)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷（W×V1÷V2）÷1000

=0.062×(△A+0.0141)÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

FFA 含量(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V1×Cpr)÷1000

=0.062×(△A+0.0141)÷Cpr

V1：加入样本体积，0.6mL；V2：萃取液体积，1mL；V3：加入血清（浆）体积，0.05 mL；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：动物组织样品质量，g； 1000：1 μmol=1000 nmol 。

注意事项：

1.蛋白含量不可直接用萃取液提取的有机相待测液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理

盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。

2.zui低检出限为 20 nmol/mL