17-OHP马17羟孕酮酶联免疫试剂盒实验原理

【资料简介】

                 17-OHP马17羟孕酮酶联免疫试剂盒说明书

实验原理：

试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中17-OHP 表达。用纯化的17-OHP 抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中17-OHP 相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的17-OHP 抗体结合，形成抗体 抗原 酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中17-OHP 的存在与否。

 17-OHP马17羟孕酮酶联免疫试剂盒样本要求：

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作程序：

 17-OHP马17羟孕酮酶联免疫试剂盒操作步骤：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50%l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40%l，然后再加待测样品 10%l。加样将样品加 于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50%l，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50%l，再加入显色剂 B50%l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50%l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

 17-OHP马17羟孕酮酶联免疫试剂盒注意事项：

1． 操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1530 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

 17-OHP马17羟孕酮酶联免疫试剂盒保存条件及有效期：

1． 试剂盒保存：；28℃。

2．有效期：6 个月