通用型LAMP试剂盒使用说明书

【资料简介】

 1.        在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：

成份	样品管	阴性对照
LAMP Mix（2×）	10 uL	10 uL
FIP引物终浓度	0.8 uM	0.8 uM
BIP引物终浓度	0.8 uM	0.8 uM
F3引物终浓度	0.2 uM	0.2 uM
B3引物终浓度	0.2 uM	0.2 uM
Loop F引物终浓度（可选项）	0.4 uM	0.4 uM
Loop B引物终浓度（可选项）	0.4 uM	0.4 uM
MgCl2（25 mM）	3 uL	3 uL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶（8U/uL）	1.5 uL	1.5 uL
补水到	20 uL	20 uL

注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1uL（水则少加1 uL），则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。

2.       混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则保温2小时；如果使用Loop引物，则保温30分钟。

3.       80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。

4.       产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:

1）        琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5 uL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱；

2）        向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料（另售）1 uL，混匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿色荧光产生；

3）        荧光定量检测。

5.       结果分析：

1）        如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂盒提供5次阳性对照，反应按下表设置：

成份	阴性对照管	阳性对照管
LAMP Mix（2×）	10 uL	10 uL
对照引物混合物	4.0 uL	4.0 uL
对照模板DNA	不加	1 uL
MgCl2（25 mM）	3 uL	3 uL
Bst DNA聚合酶（8U/uL）	1.5 uL	1.5 uL
水	1.5 uL	0.5 uL

混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中没有Loop引物，所以保温2小时。

如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家。