人C型钠尿肽（CNP）酶联免疫详细说明

【资料简介】

　　操作步骤：
　　
　　用于检测未知抗体的间接法：
　　
　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
　　
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　　加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）
　　
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　　于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
　　
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　　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
　　
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　　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　
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　　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
　　
　　试剂：
　　
　　（1）包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:
　　
　　NaHCO３1.59克
　　
　　NaHCO３2.93克
　　
　　加蒸馏水至1000ml
　　
　　（2）洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M
　　
　　KH2PO40.2克
　　
　　Na2HPO４·12H2O2.9克
　　
　　NaCl8.0克KCl0.2克
　　
　　Tween-200.05％0.5ml
　　
　　加蒸馏水至1000ml
　　
　　（3）稀释液：
　　
　　牛血清白蛋白（BSA）0.1克
　　
　　加洗涤缓冲液至100ml
　　
　　或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。
　　
　　（4）终止液（2MH２SO４）：
　　
　　蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。
　　
　　（5）底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:
　　
　　0.2MNa２HPO４（28.4克／L）25.7ml
　　
　　0.1M柠檬酸（19.2克／L）24.3ml
　　
　　加蒸馏水50ml。
　　
　　（6）TMB（四甲基联苯胺）使用液:
　　
　　TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml
　　
　　底物缓冲液（PH5.5）10ml
　　
　　0.75％H２O２32μl
　　
　　（7）ABTS使用液:
　　
　　ABTS0.5mg
　　
　　底物缓冲液（PH5.5）1ml
　　
　　3％H２O２2μl
　　
　　（8）抗原、抗体和酶标记抗体。
　　
　　（9）正常人血清和阳性对照血清。
　　
　　器材:
　　
　　（1）聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
　　
　　（2）小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
　　
　　（3）4℃冰箱，37℃孵育箱。

Elisa试剂盒实验规则：
1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。
4、实验时，要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。
10、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。