犬传染性肝炎病毒酶免试剂盒说明书

【资料简介】

犬传染性肝炎病毒酶免试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用。 96T

药品名称：

通用名：犬传染性肝炎病毒酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒定性测定犬血液、或其它相关组织中传染性肝炎病毒。

实验原理：

犬传染性肝炎病毒酶免试剂盒说明书本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中传染性肝炎病毒。用纯化的

传染性肝炎病毒抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中传染性肝炎病毒抗原相结合，

经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP 标记的传染性肝炎病毒抗体结合，形成抗

体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转

化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD

值），与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中犬传染性肝炎病毒的存在与否。

试剂盒组成：

1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶

2 酶标试剂6ml×1/瓶8 阳性对照0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板12 孔×8 条9 阴性对照0.5ml×1 瓶

4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份

5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张

6 显色剂B 液6ml×1 瓶12 密封袋1 个

标本要求：

1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测

2．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，

但应避免反复冻融。

3．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50μl。然后在待测

样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，

尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15

临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品OD 值< 临界值（CUT OFF）者为传染性肝炎病毒阴性

阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为传染性肝炎病毒阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸，使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月犬传染性肝炎病毒酶免试剂盒说明书