大鼠心钠素*说明书

【资料简介】

 大鼠心钠素*说明书

【适应症】

概述及临床意义：心钠素（Atrial Natriuretic Polypeptide ANP）又称心房利钠因子（ANF）。是心房生成和分泌的一种生物活性多肽激素，可以直接释放到血液中，具有较强的利钠、利尿、舒张血管和降低血压作用。本试剂盒为大鼠心肺内分泌，肾脏等方面的基础和临床研究，心血管疾病的诊断分型和治疗以及探讨ANP的分泌、生理作用、代谢和调节提供了一项灵敏的可靠的指标。

【测定原理】：利用液相竞争抑制原理，采用非平衡法对样品进行测定。先将待测样品或标准与*的抗血清加在一起反应一段时间后，再加入标记抗原进行竞争性结合反应，反应*后，加入免疫分离剂，分离出抗原-抗体复合物，测定复合物的放射性（B），计算各标准管的结合率（B/B0﹪）。作出标准曲线，查出样品浓度。

【成份】

药盒组成及配制

1. 缓冲液（PBS）：1瓶（液体），10ml，用前加蒸馏水稀释至50ml。

2. ANP标准品：5瓶（白色，冻干粉）：用缓冲液_____ml溶解，（如不填写，每瓶加1ml溶解）浓度为50，150，450，800，1600pg/ml。

3. ANP抗血清：1瓶（白色，冻干粉）：用缓冲液_____ml溶解（如不填写，100T药盒加10.5ml溶解, 50T药盒加5.5ml溶解）。

4. ¹²⁵I-ANP：1瓶（白色，冻干粉）：用前加缓冲液_____ml溶解（如不填写，100T药盒加10.5ml溶解, 50T药盒加5.5ml溶解）。

5. PR分离剂：1瓶（液体），100T药盒60ml，50T药盒30ml，使用前充分摇匀，直接使用。

样品收集

1、     血浆：取全血2ml，注入含7.5﹪EDTA二钠30μl和*40μl的试管中,混匀（可按比例增加或减少取血量），4℃3000rpm 离心10min，分离血浆。如需要可分装2～3份保存，放-20℃，样品可保存2个月，在-70℃以下可存放半年。测定前使样本置于室温或冷水中复融，再次4℃3000rpm离心，5 min，取上清测定 。

注：4万KIU/ml的*（2ml/瓶）与7.5﹪EDTA二钠（2ml/瓶）需用户自备。若用户自备困难我公司可提供。每套价格400元人民币。

注：测定兔血浆时，应改用25﹪PEG 500μl作分离剂，离心前NSB、S₀、 S ₁– S₅管补加γ球蛋白100μl，样品管加PBS各100μl，然后再加25﹪PEG 500μl。测兔血浆时每个标本做一个U₀，25﹪PEG和γ球蛋白由我公司提供。

2、组织：取出活组织，吸去血迹，称重，尽快加入生理盐水1ml碾磨，制成匀浆， 4℃3000rpm离心，15min，取上清，-20℃以下保存。测定前做预实验确定样品稀释度。可取3-5份做小样，将样品做原倍，1：5，1：20倍稀释，选择合适的稀释度。    

另外，每种组织的样品非特异结合（U₀）可能有些差异，每份标本单独做一个U₀或每组做一个U₀。取组织的重量一般在300～400mg左右为好。

测定方法

本实验采用非平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作：

ANP  RIA 加液程序（μl）

	T	NSB	S0	S1-S5	U	U0
缓冲液	-	200	100	-	-	100
标准液	-	-	-	100	-	-
待测样品	-	-	-	-	100	100
抗血清	-	-	100	100	100	-
充分摇匀，4℃放置24h
125I-ANP	100	100	100	100	100	100
充分摇匀，4℃放置24h
PR分离剂		500	500	500	500	500
混匀，室温放置20min，4℃3500rpm离心25min，吸弃上清液，在γ计数器上测定沉淀cpm数。

结果计算

1、以B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/BO计算标准及待测样品结合百分率，在半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序，直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。

NSB％＝（NSB管的cpm数÷T管的cpm数）×100％

Bo％＝（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）÷T管的cpm数×100％

B／Bo％＝（标准或样品管的cpm数－NSB管的cpm数）÷（Bo管的cpm数－NSB管的cpm数）×100％

2、组织样品得出样品浓度后，再根据称取组织量，计算出每mg组织中的量。

主要技术指标

1、NSB﹤5﹪。

2、灵敏度 <15pg/ml

3、可测范围10~1600pg/ml。

4、批内变异CV：﹤7.7﹪。         

   批间变异CV：<11.5%。

5、特异性：本抗体与*，β—内啡肽，P—物质，内皮素及降钙素基因相关肽等多肽均无交叉反应。

正常血浆参考值

各实验室应建立自己的大鼠正常值

【放射性核素半衰期】

碘[¹²⁵I]物理半衰期（T½）：60天

【注意事项】

1、使用本药盒的实验室应具有“放射性同位素使用许可证”，使用过程中产生的放射性废物应按国家有关规定处理

2、PR试剂在使用前需充分混匀，必要时边加边混，不可冰冻保存。

3、如果用户测定的样品是兔血浆，请在订药盒时提前告知。

4、标记品不要提前配制，请在需加标记的当天配制。

5、用户如遇特殊情况，收到药盒后不能在当月使用，请您将标准品、抗血清冷冻保存，缓冲液、分离剂、*4℃保存，          7.5﹪EDTA二钠室温保存，若出现沉淀，加热即可溶解，待下次只单购一瓶标记即可。

6、药盒内任何一种试剂均可单独购买。

7、本药盒每月快件寄出，一般在月底寄下月产品，用户请在每月20日前通知我们，以便及时寄出。

【贮藏】

常温运输，4℃保存

【有效期】

45天

【执行标准】

放射免疫分析基本原理。

本药盒提供给医疗科研单位和高等医学院校及各大医院做科学研究用，可用于大鼠的血样、尿液、组织匀浆液及各种体液的测定