猪瘟抗体（CSF-Ab）ELISA试剂盒说明书

【资料简介】

 

猪瘟抗体（CSF-Ab）ELISA

 

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

 

 

96T

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中瘟抗体（ CSF-Ab）表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪瘟抗体（CSF-Ab）表达。用纯化的猪瘟抗原包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中猪瘟抗体（CSF-Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP标记的猪瘟抗原结合，形成抗原 -抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（ OD值），与 CUTOFF值相比较，从而判定标本中猪瘟抗体（ CSF-Ab）的存在与否。

试剂盒组成

1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 阳性对照 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 阴性对照 0.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个

标本要求

1           标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融

2           NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。

 

操作步骤

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2孔、阳性对照 2孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。

4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

 

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥1.00; 阴性对照平均值 ≤0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值 +0.15阴性判定：样品 OD值<临界值（CUT OFF）者为猪瘟抗体（CSF-Ab）阴性阳性判定：样品 OD值≥临界值（CUT OFF）者为猪瘟抗体（CSF-Ab）阳性

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注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M的硫酸，使用时必须注意安全。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期： 6个月