人轮状病毒IgA（RV-IgA）ELISA试剂盒说明书

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人轮状病毒IgA（RV-IgA）酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供研究使用。                                            48T

药品名称：
通用名：人轮状病毒 IgA（RV-IgA ）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
    本试剂盒定性测定人血液、或其它相关组织中轮状病毒 IgA（RV-IgA ）。
实验原理：
    本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA ）测定标本中人轮状病毒IgA（RV-IgA ）。
用纯化的轮状病毒 IgA（RV-IgA ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中轮状病毒
IgA（RV-IgA ）抗原相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的轮状病
毒 IgA（RV-IgA ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB
显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪
在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中人轮状病毒
IgA（RV-IgA ）的存在与否。
试剂盒组成：

  1   20 倍浓缩洗涤液         20ml ×1 瓶    7   终止液                      3ml ×1 瓶

  2   酶标试剂              3ml ×1/瓶     8   阳性对照                     0.5ml ×1 瓶

  3   酶标包被板             12 孔×4 条     9   阴性对照                     0.5ml ×1 瓶

  4   样品稀释液             3ml ×1 瓶     10  说明书                      1 份

  5   显色剂 A 液           3ml ×1 瓶     11  封板膜                      2 张

  6   显色剂 B 液           3ml ×1 瓶     12  密封袋                      1 个

标本要求：
    1．标本处理：血清、血浆标本可直接检测
    2 ．标本按要求制备后尽早进行实验。如不能及时检测，可将标本在-20℃保存一个月，
       但应避免反复冻融。
    3．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤：
1.  编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
    孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.  加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50μl。然后在待测
    样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，
    尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。
4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
    重复 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.  温育：操作同 3 。
8.  洗涤：操作同 5。
9.  显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
    15分钟
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
    液后 15 分钟以内进行。

人轮状病毒IgA（RV-IgA）ELISA试剂盒说明书

结果判定：
    试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;  阴性对照平均值≤0.15
    临界值（CUT OFF）计算：临界值= 阴性对照孔平均值+0.15
    阴性判定：样品OD 值<          临界值（CUT OFF）者为轮状病毒IgA（RV-IgA ）阴性
    阳性判定：样品OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为轮状病毒IgA（RV-IgA ）阳性
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
   用完，板条应装入密封袋中保存。
3 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4 ．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5 ．底物请避光保存。
6 ．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M  的硫酸，使用时必须
   注意安全。

保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 个月
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