大鼠NADPH氧化酶（NADPH-oxidase）说明书

【资料简介】

大鼠NADPH氧化酶（NADPH-oxidase）实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中丙酮酸激酶（PK） 水平。用纯化的丙酮酸激酶（PK）
抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙酮酸激酶（PK） ，再与 HRP
标记的丙酮酸激酶（PK） 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物
TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜
色的深浅和样品中的丙酮酸激酶（PK） 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD
值），通过标准曲线计算样品中丙酮酸激酶（PK） 浓度。  
大鼠NADPH氧化酶（NADPH-oxidase）试剂盒组成  
1  30倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  标准品（800 mU/L ）  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12孔×8 条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 张    
6  显色剂 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 个
大鼠NADPH氧化酶（NADPH-oxidase）标本要求  
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
大鼠NADPH氧化酶（NADPH-oxidase）操作步骤
1.   标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
400 mU/L   5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
200 mU/L   4 号标准品  150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
100 mU/L   3 号标准品  150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
50 mU/L   2 号标准品  150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
25 mU/L   1 号标准品  150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
 
 
2.   加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，
然后再加待测样品 10 µl（样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.   温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。      
4.   配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5.   洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。  
7.   温育：操作同 3。
8.   洗涤：操作同 5。
9.   显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.  终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。  测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。