大鼠Smad7说明书

【资料简介】

大鼠Smad7实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠Smad7水平。用纯化的大鼠Smad7抗体包
被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Smad7，再与HRP标记的Smad7
抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在
HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的
Smad7呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品
中大鼠Smad7浓度。  
大鼠Smad7试剂盒组成 
1  30倍浓缩洗涤液  20ml×1瓶  7  终止液  6ml×1瓶
2  酶标试剂  6ml×1瓶  8  标准品（16ng/ml）  0.5ml×1瓶
3  酶标包被板  12孔×8条  9  标准品稀释液  1.5ml×1瓶
4  样品稀释液  6ml×1瓶  10  说明书  1份
5  显色剂A液  6ml×1瓶  11  封板膜  2张    
6  显色剂B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
大鼠Smad7标本要求  
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
大鼠Smad7操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
8ng/ml  5号标准品  150µl 的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
4ng/ml  4号标准品  150µl 的5号标准品加入150µl标准品稀释液
2ng/ml  3号标准品  150µl 的4号标准品加入150µl标准品稀释液
1ng/ml  2号标准品  150µl 的3号标准品加入150µl标准品稀释液
0.5ng/ml  1号标准品  150µl 的2号标准品加入150µl标准品稀释液
 
 
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，
 
 
然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。      
4.  配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。  
7.  温育：操作同3。
8.  洗涤：操作同5。
9.  显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.  终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。  测定应在加终止
液后15分钟以内进行。