人T细胞白血病细胞

【资料简介】

 人T细胞白血病细胞实验步骤：在超净台内，安装好滤器。

用去离子水溶解1640培养基，并用磁力搅拌器搅拌2 h，使之充分溶解。

在超净台内过滤。

分装到250 mL的玻璃瓶内。

用封口膜封好，-20℃保存，过滤结束时，还要取少许培养基进行菌培，验证培养基是否是无菌。

胎牛血清的处理：

没有灭活的血清中含有补体成分，需要将血清在56℃条件下灭活30 min。在水浴锅内进行，灭活的过程中，要不停地摇晃，使受热均匀，防止沉淀析出来。

注意：

刚取出的冻存血清不要立即放入56℃中，因为突然的温度升高会使装血清的玻璃瓶破裂，应该放在室温逐渐溶解，然后，再进行灭活处理。

 人T细胞白血病细胞生长培养基的配制：

90 mL IMDM中加入大约10 mL的胎牛血清（10% 左右），双抗可以不加。

（有资料表明双抗对细胞有一定的毒副作用）Hanks 和D-Hanks液，以及*的配制Hanks液是一种常用的*，D-hanks液是不含钙镁的Hanks液。它们与细胞的生长状况下的pH值和渗透压一致，细胞在Hanks液中可生存几个小时，Hanks液主要用于清洗细胞。

D-Hanks液主要用于配制*。配制Hanks液需将CaCl2溶于蒸馏水，再将其它试剂配制成溶液，将两次配制的溶液混合，定容。*是一种常用的细胞消化液，在原代培养时，用*消化，使细胞从组织块中游离出来。

传代培养时，用*消化贴壁的细胞，并分散成单个细胞。

*分离细胞的能力与不仅与*作用的温度、时间、浓度和pH有关，还与细胞的类型和特性有关。

用于原代培养消化组织块采用的浓度为：0.1% 或 0.125%；

用于传代培养采用的*浓度为：0.25%或者0.2%。

*的配制：

1）由于*的作用主要机制是通过螯合钙镁离子，而钙镁离子是保持细胞和细胞之间相互连接所必需的，所以，*的配制用无钙镁的D-Hank液，避免钙镁离子干扰*的活性。

2）*在pH8.0时活性zui强，在过滤除菌前，须用NaHCO3干粉调溶液的pH值。

3）*受热容易分解，所以避免盛夏配制，在配制过程中，温度保持在4℃，zui后-20℃冻存。反复冻溶会影响*的活性，要分装冻存。

4）血清能降低*的活性，所以，在终止*的消化反应时，可加入含有血清的培养基。