（AFB1）Elisa试剂盒技术参数

【资料简介】

本试剂盒仅供研究使用。
1  使用目的：
本试剂盒用于检测饲料和谷物中AFB1含量。
（AFB1）实验原理
本试剂盒采用直接竞争 ELISA 方法，在微孔板包被有AFB1偶联抗原，加入AFB1标准品或样品，游离AFB1与微孔条上预包被的AFB1偶联抗原互相竞争抗AFB1抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止
液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在 450nm 波长下进行检测，吸光值与样品中AFB1含量成反比，通过标准曲线计算样品中AFB1的含量。    
3  试剂盒组成  
3. 1  预包被的 AFB1偶联抗原的可拆酶标板：1 块（12 孔×8条）。
3. 2 AFB1标准品：6 瓶（1ml/ 瓶），含量分别是：  0 ng/ml ，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7
ng/ml,8.1 ng/ml。
3. 3 抗AFB1抗体酶结合物：1 瓶（6ml ）。
3. 4 显色液 A：1 瓶（6ml ）。
3. 5 显色液 B ：1 瓶（6ml ）。
3. 6 终止液：1 瓶（6ml ），2M 硫酸。
3. 7 *：1 瓶（10 × ,    6 ml），用于样品稀释用。
3. 8 浓缩洗涤液：1 瓶（20×，20 ml），用于洗板。
3. 9 说明书一份。
4  需要而未提供的材料
4.1  设备
4.1.1波长450nm 酶标仪。  
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2  试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。 
（AFB1）贮存
5.1  试剂盒贮存于2~8 ℃，切勿冷冻
5.2  未用完的微孔板应该密封干燥保存
6  注意事项
6.1  使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2  不要使用过期试剂盒。
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6.3  试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
6.4  标准品中含有AFB1，使用时应特别注意，操作时应带手套。
6.5  终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6  不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
6.7  不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响
实验结果。
6.8  稀释样本时必须用本试剂盒中的*，否则会影响实验结果
6.9  混合试剂时应避免起泡。
7  工作液准备
7.1 AFB1 标准品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml 
7.2  浓缩洗涤液：用蒸馏水按1: 20（1+ 19） 稀释备用
7.3  *：备用
7.3  显色剂：已备用，避免光线直照
7.4  反应终止液：已备用
（AFB1）样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则
会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的样品，加  20ml 70% 甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman 滤纸过滤
8.4取25 µl 处理后的样品，加入25µl *于反应孔中（样本稀释倍数为2）
9  酶免分析步骤
9.1  实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室
温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8 ℃干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8 ℃保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2  分析步骤
9.2.1 预*行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8 ℃保存
9.2.3  样品稀释液（10× ）、浓缩洗涤液（10× ）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml 标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入50µl 的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入50µl 样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl 的抗AFB1抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。  
9.3 37℃温浴30min  （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液
体。