大提柱式藻类RNAout

【资料简介】

大提柱式藻类RNAout
产品及特点 本产品是在本公司柱式藻类RNAout（CAT#:120503）的大提升级产品，跟柱式藻类RNAout相比，它具有下列特点：
1. 样品处理量大，zui多可以处理50 mL液体藻类培养物。
2. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
3. RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
4. RNA产量高，一般在20-70 ug/mL液体藻类培养物（约2.0 ×107个细胞）。
非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。
规格及成分 成 份 5次纸盒包装
溶液A 50 mL
溶液B 50 mL
溶液C 100 mL+50 mL
溶液D 50 mL
大提离心吸附柱 5套
通用洗柱液 100 mL
RNA洗脱液 10 mL
使用手册 1份

运输及保存 常温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1. 将 50 mL液体藻类培养物在塑料离心管中5,000-7,000 rpm 4℃离心 1分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2. 加入10 mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入10 mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。
5. 5,000-7,000 rpm 4℃离心3-5分钟，转移上清到一自备的、干净的50 mL塑料离心管中。
6. 在上清液中加入2 mL自备的氯仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5,000-7,000 rpm离心3-5分钟，转移上清液到一自备的、干净的50 mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液（约10 mL左右）3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为10 mL，则加入30 mL溶液C和10 mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移后需要室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5,000-7,000 rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重复操作，直到混合液全部挂柱。
10. *次洗涤：将10 mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用10 mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12. 室温离心空柱子（带收集管）半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 50 mL塑料离心管中，加入1 mL RNA洗脱液。
14. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
将5-10 uL RNA溶于TE缓冲液中（pH7.5-8.2之间）检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度×体积）和产率（RNA产量/细菌用量）。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。