使用说明--大鼠皮质酮 （CORT）elisa试剂盒

【资料简介】

 试剂盒使用说明书

大鼠皮质酮 （CORT）elisa试剂盒本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相

关液体样本中皮质酮 （CORT）的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠皮质酮 （CORT）水平。用纯化的大鼠皮质酮

（CORT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入皮质酮 （CORT），再

与HRP 标记的皮质酮 （CORT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后

加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄

色。颜色的深浅和样品中的皮质酮 （CORT）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度

（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠皮质酮（CORT）浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存

说明书 1 份 1 份

封板膜 2 片（48） 2 片（96）

密封袋 1 个 1 个

酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

标准品：540ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存

标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存

酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

显色剂A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

显色剂B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存

终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上

清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心

20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次

离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/

分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞

浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分

2

钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待

检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠皮质酮 （CORT）elisa试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在*、第二孔中分别加标

准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二

孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混

匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，

浓度分别为360ng/L，240ng/L ，120ng/L，60ng/L， 30ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样

品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止

液后15 分钟以内进行。

注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间

控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值

大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

3

算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物请避光保存。

7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9． 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释

倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

倍数，即为样品的实际浓度。

（此图仅供参考）

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.95 以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%

大鼠皮质酮 （CORT）elisa试剂盒检测范围：

15ng/L -450ng/L

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月