RD 兔抗人神经肽Y 中文说明书

【资料简介】

 

兔（Rabbit）神经肽Y（NPY）ELISA检测试剂盒

本试剂仅供研究使用

 

试验原理：

        NPY试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NPY浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将NPY和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NPY的浓度呈比例关系。

 

试剂盒内容及其配制：

试剂盒成份	96孔配置	48孔配置
96/48人份酶标板	1块板（96T）	半块板（48T）
塑料膜板盖	1块	半块
标准品：1000pg/ml	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
空白对照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
标准品稀释缓冲液	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
生物素标记的抗NPY抗体	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
亲和链酶素-HRP	1瓶（12ml）	1瓶（5ml）
洗涤缓冲液	1瓶（20ml）	1瓶（10ml）
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
终止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）

 

自备材料：

1.  蒸馏水。

2.  加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3.  振荡器及磁力搅拌器等。

 

试剂的准备：

 

1.   标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

1000 pg/ml	（6号标准品）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul
500 pg/ml	（5号标准品）	100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
250 pg/ml	（4号标准品）	100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
125 pg/ml	（3号标准品）	100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
62.5 pg/ml	（2号标准品）	100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
31.5 pg/ml	（1号标准品）	100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 pg/ml	（空白对照）	原倍浓度不用稀释直接加入50ul

 

2.   洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

 

试剂盒性能：

 

1.   灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2.   特异性：不与其它细胞因子反应。

3.   重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

 

操作步骤：

 

1.   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8.   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

结 果 判 断 与 分 析：

 

1、  仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、  以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的NPY标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的NPY含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3、  检测值范围： 0-1000pg/ml

4、  敏感度：3.9pg/ml