血液直扩PCR试剂盒使用说明书

【资料简介】

血液直扩PCR试剂盒
Blood Direct Amplification PCR Kit
使用手册V1.0

产品及特点    本产品是即用型PCR试剂盒2.0的改良产品，含有*的抗干扰Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2和反应缓冲液等组成的Master Mix，额外提供的血液裂解试剂可以简便快速地裂解动物抗凝血液，并释放出基因组DNA。整个过程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代谢物，也无需有机溶剂抽提，即可得到质量稳定的基因组DNA，无需后续纯化步骤即可直接用于PCR扩增鉴定。本产品特点如下：
1.    简单快捷，无需提取动物血液基因组DNA，可直接使用血液裂解混合液进行PCR扩增，极大地简化了实验步骤。
2.    灵敏度高，1次可以处理100uL（含有核红细胞的血液）或10uL（含无核红细胞的血液）。
3.    兼容性强，可用于各种动物血液。
4.    一站式，产品经过优化，不需要客户单独优化每个成分。
规格及成分    成分    编号    100次纸盒包装
溶液A    130852A    30 mL
溶液B    130852B    12 mL
溶液C    130852C    550 uL
溶液D    130852D    12 mL
血液直扩PCR Mix    130852E    2×1 mL
去离子水        10 mL

自备试剂    超纯水。
运输及保存    低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法    一：含有核红细胞血液的预处理：
1.  将1-10uL的动物血液置于新离心管中，加入95uL的溶液B和5uL的溶液C，涡旋5秒。
2.  56℃孵育10-30分钟。
3.  95℃孵育5分钟。
4.  再加入100uL的溶液D，涡旋混匀。
5.  2-8℃贮存血液裂解混合液。
该血液样品可直接作为模板进行PCR。
二：含无核红细胞血液的预处理：
1.  将100uL的动物血液置于新离心管中，加入250uL的溶液A，颠倒离心管5次。
2.  13000g离心60秒，弃去上清；向其中加入95uL的溶液B和5uL的溶液C，涡旋5秒后重悬沉淀。
3.  56℃孵育10分钟。
4.  95℃孵育5分钟。
5.  再加入100 uL的溶液D，涡旋混匀。
6.  2-8℃贮存血液裂解混合液。
该血液裂解混合液可直接作为模板进行PCR。
二：PCR操作：
1.    设置PCR反应（以25 uL的标准PCR反应体系为例）在一干净的PCR管中，加入下列成分：
血液直扩PCR Mix    12.5 uL
血液样品    4 uL
自备引物一    0.5 uL
自备引物二    0.5 uL
补超纯水到    25 uL
2.    放入PCR仪中进行PCR，PCR循环参数是：
PCR前变性    94-95℃ 1-5分钟    
PCR循环    94-95℃ 30秒    循环25-40次
    45-70℃ 10-30秒    
    72℃ 80秒    
PCR后延伸    72℃ 7分钟    
zui终保存温度    4-10℃    

关联产品    血液直扩Taq DNA聚合酶