大鼠多巴胺（DA）ELISA试剂盒说明书

【资料简介】

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大鼠多巴胺（DA）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

 

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：大鼠多巴胺（DA）酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中多巴胺（DA）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠多巴胺（DA）水平。用纯化的大鼠多巴胺

（DA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入多巴胺（DA）再与

HRP标记的多巴胺抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB

显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深

浅和样品中的多巴胺（DA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通

过标准曲线计算样品中大鼠多巴胺（DA）浓度。

试剂盒组成：

1 20 倍浓缩洗涤液 30ml×1 瓶            7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶                   8 标准品（135ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条               9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶                10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶               11 封板膜 2 张

6 显色剂B液 6ml×1/瓶                12 密封袋 1 个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标

准品 100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二

孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，

浓度分别为90ng/L，60ng/L ，30ng/L，15ng/L， 7.5ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样

品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 

4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止

液后 15分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间

控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值

大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

检测范围：

5ng/L-100ng/L

规格：

96 人份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月