牛奶过敏原特异性抗体IgE酶联免疫分析试剂盒使用说明书

【资料简介】

 

检测范围：                                                            96T

10 pg/ml -350 pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定牛奶及相关液体样本中过敏原特异性抗体IgE 含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛奶过敏原特异性抗体IgE 水平。 用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入过敏原特异性抗体 IgE，再与HRP 标记的抗原结合， 形成抗原-抗体-抗原复合物， 经过*洗涤后加底物TMB 显色。 TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛奶过敏原特异性抗体 IgE 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中牛奶过敏原特异性抗体IgE 浓度。  

试剂盒组成  

1  30倍浓缩洗涤液  20ml×1瓶  7  终止液  6ml×1 瓶

2  酶标试剂  6ml×1瓶  8  标准品（640pg/ml）  0.5ml×1 瓶

3  酶标包被板  12 孔×8条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶

4  样品稀释液  6ml×1瓶  10  说明书  1 份

5  显色剂A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 张   

6  显色剂B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个

标本要求  

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

320pg/ml  5 号标准品  150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液

160pg/ml  4 号标准品  150µl的5 号标准品加入150µl标准品稀释液

80pg/ml  3 号标准品  150µl的4 号标准品加入150µl标准品稀释液

40pg/ml  2 号标准品  150µl的3 号标准品加入150µl标准品稀释液

20pg/ml  1 号标准品  150µl的2 号标准品加入150µl标准品稀释液

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样50µl， 待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。    

4.  配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。  

7.  温育：操作同3。

8.  洗涤：操作同5。

9.  显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的OD值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。  

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5） 。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存： ；2-8℃。

2．有效期：6个月