培养基的配制

【资料简介】

一、仪器设备及试剂
电炉
天平（0.0001 g）
高压灭菌锅
量筒：l0 ml、20 ml、100 ml、500 ml
烧杯：1000 ml、500 ml、250 ml
移液管：1 ml、2 ml、 5 ml
吸管若干、记号笔
三角瓶或试管、试管架
锡铂纸、玻璃棒
配制好的各种母液，如大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、生长调节剂等，个别生长调节剂要随配随用。
蒸馏水、pH试纸
蔗糖、琼脂 等
          1 mol/L NaOH 溶液、1 mol/L HCl溶液 。
  二、方法和步骤
1 量取所配培养基总体积的2/3体积的蒸馏水，如要配l升培养基, 先量取约700 ml体积的水。
        2 根据培养基配方， 用量筒量取所需要的各种元素的母液。
 

物质	加入体积或重量
大量元素母液(10×)	100ml
微量元素母液(1000×)	1 ml
有机物质母液(1000×)	1 ml
铁盐母液(1000×)	10 ml
蔗糖	30 g
琼脂	8 g

吸取母液时，注意应先将几种母液按顺序排好，不要弄错以免使培养基中药品成分发生改变。在培养不同的外植体时，应加入不同的激素，如本实验中培养康乃馨侧芽或茎段时就加入1ml的1 mg/ml的6-BA；而另一个实验胡萝卜愈伤组织培养中应加入2ml的1 mg/ml的2,4-D。加入一种母液后应先搅拌均匀，避免因不均而使局部浓度过高而引起沉淀，琼脂可于加入蔗糖调节完pH值后再加入，此时应注意搅拌，以免琼脂或蔗糖沉淀于烧杯底而炭化。加热至沸腾片断，以使琼脂充分溶解，检查时可注意烧杯内溶液是否透明。
      3 调节培养基的pH值，用pH计或pH试纸测定
培养基的pH按照培养材料的要求分别用       1 mol/L NaOH溶液、1 mol/L HCl溶液来调节所配制培养基的pH值，一般培养基的pH值约为5.8，培养的材料不同，对培养基的pH值要求也不同。
4 分装   将配制好的培养基分别装在事先洗净的三角瓶，用锡铂纸封口，注明标签，然后和用牛皮纸或报纸包好的培养皿及用三角瓶装好的蒸馏水一道进行高压灭菌。
          5 培养基的灭菌   一般用手提式医用高压锅来灭菌（方法略），本实验采用全自动高压灭菌锅。
6 培养基的保存   消毒过的培养基通常放在接种室或培养室中保存，一般 应在消毒后的两周内用完，不要超过一个月。
 
三、注意事项
激素应在调节pH之前加入，因为有些激素是用酸或碱溶解的，在调节pH好之后加入会改变pH值。pH过酸或过碱对培养基均是不利的，会导致过软或过硬的结果，从而影响培养质量。
在本次实验中将下次实验所需的其它材料一同灭菌处理。