猪白细胞介素-2（IL-2）酶联免疫分析（ELISA）

【资料简介】

猪白细胞介素-2（IL-2）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书

操作步骤

1.    标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在*、第二孔中分别加标 准品 100µl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50µl，混匀；然后从*孔、第二 孔中各取 100µl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50µl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl 弃掉，再各取 50µl 分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取 50µl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50µl，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50µl，混匀后从第九第十孔中各取 50µl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50µl， 浓度分别为 320 ng/L，160 ng/L，80 ng/L，40 ng/L，20 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样 品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。

3.    温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.    配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。

5.    洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.    加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.    温育：操作同 3。

8.    洗涤：操作同 5。

9.    显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.  测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。