鸡巨噬细胞炎症蛋白-1（MIP-1）ELISA试剂盒检测

【资料简介】

鸡巨噬细胞炎症蛋白-1(MIP-1)ELISA试剂盒检测

实验原理：

鸡巨噬细胞炎症蛋白MIP-1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知MIP-1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将MIP-1和*标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中MIP-1的浓度呈比例关系。

操作步骤： 

1.鸡巨噬细胞炎症蛋白MIP-1使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.鸡巨噬细胞炎症蛋白MIP-1每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

鸡巨噬细胞炎症蛋白MIP-1操作注意事项：

●试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

●实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

●不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

●使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

●使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

●鸡巨噬细胞炎症蛋白MIP-1底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

●加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

●按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。