总RNA的提取（Trizol法提取）

【资料简介】

　　在收集到生物材料之后，能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
　　
　　1.提取组织RNA时，每50~100mg组织用1mlTrizol试剂对组织进行裂解：提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5~106个细胞加1mlTrizol后，反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞；
　　
　　2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中，在试问15~30℃下放置5分钟；
　　
　　3.在上述EP管中，按照每1mlTrizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15~30℃）放置2~3分钟后，12000g（2~8℃）离心15分钟；
　　
　　4.去上层水相置于新EP管中，按照每1mlTrizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15~30℃）放置10分钟后，12000g（2~8℃）离心10分钟；
　　
　　5.弃上清，按照每1mlTrizol加1ml75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2~8℃）离心5分钟，弃上清；
　　
　　6.让沉淀的RNA在室温在自然干燥；
　　
　　7.用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。