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人(Human)乙型肝炎表面抗原ELISA检测试剂盒操作方法
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关 键 词 | 人ELISA试剂盒,ELISA试剂盒 |
- 【资料简介】
试验原理:
HBSAG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知HBSAG浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将HBSAG和*标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中HBSAG的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份
96孔配置
48孔配置
96/48人份酶标板
1块板(96T)
半块板(48T)
塑料膜板盖
1块
半块
标准品:500pg/ml
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
空白对照
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
标准品稀释缓冲液
1瓶(8.0ml)
1瓶(4.0ml)
*标记的抗HBSAG抗体
1瓶(8.0ml)
1瓶(4.0ml)
亲和链酶素-HRP
1瓶(12ml)
1瓶(5ml)
洗涤缓冲液
1瓶(20ml)
1瓶(10ml)
底物A
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
底物B
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
终止液
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
操作注意事项:
● 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
● 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
● 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
● 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
● 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
● 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
● 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
● 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
操作步骤:
- 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
- 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
- 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
- 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
- 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
- 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
- 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
- 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
- 在450nm波长处测定各孔的OD值。
结 果 判 断 与 分 析:
- 仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
- 以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的HBSAG标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的HBSAG含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
- 检测值范围: 0-500pg/ml
- 敏感度:1.95pg/ml
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