FITC标记抗体-Chadwick氏法

【资料简介】

 试剂：
      抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞。
 
      材料：
      离心机及离心管、三角烧瓶（25ml）、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯（500ml）等。
 
      方法与步骤：
      1.  抗体的准备。用0—4℃ pH8.0的PBS将免疫球蛋白溶液浓度稀释为30—40mg/ml，置于三角烧瓶内，放入冰槽中；
      2.  荧光素的准备。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg荧光素计算，称取所需的荧光素量，用3%重碳酸钠水溶液溶解；
      3.  将上述已准备好的抗体与荧光色素溶液等量混合，充分搅拌，使其在0—4℃冰箱中结合18—24h；
      4.  透析。荧光素与球蛋白结合完毕后，将球蛋白的溶液以2500r/min离心20min，除去其中少量的沉淀物后，装入透析袋中再置于烧杯中，在0—4℃下用pH8.0的缓冲盐溶液透析过夜；
      5.  过柱。取透析过夜的标记物，过葡萄糖凝胶G-25或G-50柱，分离出游离荧光素，收集标记的荧光抗体进行鉴定。