ELISA试剂盒抗原抗体反应的特异性

【资料简介】

    ELISA试剂盒的基本原理就是将抗原抗体固定到特定的载体上进行反应，并通过酶催化底物发生化学变化将抗原抗体反应通过颜色的形式显现出来。主要步骤分为如下5个部分：
（1）将抗原抗体反应固相化：即试验中的包被环节，ELISA试剂盒使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙烯表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破坏蛋白分子结构，保持其生物学特性和免疫学活性； 
（2）封闭：固相吸附蛋白是非特异性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，为了保障，因此，ELISA试剂盒包被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭。一般认为牛血清白蛋白是zui为理想的封闭剂，也可用脱脂奶粉、明胶、牛血清替代。
（3）抗原抗体反应：抗原或抗体在适当的介质下可进行特异的抗原抗体反应。
（4）酶反应：酶可以通过共价键与抗原或抗体连接形成结合物，当抗原抗体反应的时候，被检测靶目标中也结合了酶分子。
（5）底物反应：结合在抗原抗体中的酶分子，可以促使底物发生颜色反应，ELISA试剂盒检测人员可以通过颜色来判定是否有免疫反应的存在，并可通过颜色的深浅判断标本中相应抗原或抗体的含量（颜色反应与抗原抗体的含量成正比），可以裸眼观察，也可借用酶标仪在适当的波长读取吸光度值。