细胞的碘化丙啶染色用于FACS分析

【资料简介】

FACS用于研究细胞组分DNA，碘化丙啶（PI）嵌入核酸双链中并可以发荧光。它不能进入活细胞，但是可以进入正在或者已经死亡的细胞。因此PI可以用于免疫荧光染色来鉴定死细胞。DNA染色可以用于研究细胞周期。相对的DNA含量可以坚持G1，G2和S期细胞的比例。在DNA染色中凋亡的细胞有*的颜色。
 
一、材料和试剂
1.  TritonX-100（SigmaCatalogNo.T9284）

2.  碘化丙啶（SigmaCatalogNo.P-4170）

3.  乙醇

4.  RNaseA（SigmaCatalogNo.R4642）
 
二、仪器
1.  离心机

2.  流式细胞仪器（FACS）
 
三、步骤
1.  处理和收集细胞，将细胞固定到0.5 ml 70%EtOH（预冷到-20°C过夜）。

2.  存储固定的细胞到冰上至少一个小时zui多到几天。

3.  离心细胞2 min，4 000 rpm。

4.  在含有0.25%TritonX-100的0.5 ml PBS溶液中重悬细胞，并且在冰上孵育15 min。

5.  离心细胞2 min，4 000 rpm。

6.  弃掉上清液，并在含有10 μg/ml RNaseA和20 μg/ml PI储存液的0.5 ml PBS重悬细胞，转移到FACS管子中在黑暗中室温孵育30分钟。

7.  准备做FACS。