兔胰岛素（INS）elisa试剂盒说明书

【资料简介】

兔胰岛素(INS)elisa试剂盒说明书
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔胰岛素(INS)水平。用纯化的兔胰岛素(INS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(INS)，再与HRP标记的胰岛素(INS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(INS)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中兔胰岛素(INS)浓度。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
20 mIU/L  5 号标准品  150?l 的原倍标准品加入 150?l 标准品稀释液
10 mIU/L  4 号标准品  150?l 的 5 号标准品加入 150?l 标准品稀释液
5 mIU/L  3 号标准品  150?l 的 4 号标准品加入 150?l 标准品稀释液
2.5 mIU/L  2 号标准品  150?l 的 3 号标准品加入 150?l 标准品稀释液
1.25 mIU/L  1 号标准品  150?l 的 2 号标准品加入 150?l 标准品稀释液
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50?l， 待测样品孔中先加样品稀释液 40?l，然后再加待测样品 10?l（样品zui终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂 50?l，空白孔除外。
7.  温育：操作同 3。
8.  洗涤：操作同 5。
9.  显色：每孔先加入显色剂 A50?l，再加入显色剂 B50?l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50?l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。