单层生长细胞的免疫荧光标记实验

【资料简介】

实验材料    单层细胞
试剂、试剂盒    PBS多聚甲醛甲醇抗体
仪器、耗材    离心机水浴锅培养箱
实验步骤    
1.  置生长成片的单层细胞于冰上冷却，吸去培养液并以4℃PBS洗涤。吸去PBS。

2.  如欲研究细胞表面抗原，则以2%PFA于冰上面定30 min。如为细胞质抗原，则可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以*甲醇在普通冰箱的结冻室（-10~-20℃）固定15 min。
 
3.  吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀释的笫一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。
 
4.  加*抗体于培养皿中，使其恰好覆盖细胞，4℃温育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。
 
5.  稀释的笫二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min。
 
6.  加第二抗体于细胞上，4℃温育4 h。然后用4℃PBS洗4次。
 
7.  若不想立即观察细胞，则将细胞于PBS中存放。盖好培养皿，以铝箔包裹，冷藏，在24 h 内观察此实验结果是很重要的，因荧光会迅速减弱或与细胞解离。