冰冻切片基质金属蛋白酶原位明胶酶谱法荧光染色试剂盒产品说明书

【资料简介】

主要用途
冰冻切片基质金属蛋白酶（MMP）原位明胶酶谱法（in situ zymography）荧光染色试剂是一种旨在通过异硫氰酸荧光素标记的明胶作为底物，针对未固定处理的冰冻切片予以染色处理，基质金属蛋白酶切离底物产生高度绿色荧光，来定位组织中的基质金属蛋白酶活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种冰冻动物组织的基质金属蛋白酶-2和9的分析。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，荧光清晰，重复性好。
技术背景
基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称，因含有金属（锌、钙）离子而得名。迄今为止发现的MMPs至少有28种，几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质（extracellular matrix）成分，同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、组织再吸收（tissue resorption）、疾病发生，例如关节炎、癌细胞浸入转移等。根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类：（1）胶原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖；（2）明胶酶（Ⅳ型胶原酶）：MMP2、MMP9，又称明胶酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维；（3）基质溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11，主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金属蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。体内绝大多数细胞并不储备MMPs，当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成，合成的MMPs以无活性的酶原（proenzyme）形式分泌到细胞外，随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活，一种激活的MMPs可激活另一种MMPs，形成瀑布效应。原位明胶酶谱法荧光染色（in-situ fluorescence zymography）技术在于提高基质金属蛋白酶检测的敏感性，使用异硫氰酸荧光素（FITC）标记的明胶作为底物，经过基质金属蛋白酶水解后产生荧光多肽，据此在荧光显微镜下检测酶的活性和位置。