染色体CBG标本制备实验

【资料简介】

实验方法原理    
异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的，因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近，或在染色体臂上呈现“团块”，这些染色质主要由C显带技术呈现，故称为C带。CBG即C带、Ba（OH）2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA，但在C带区有很强抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可见效果良好的C带。

抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先，酸处理可使DNA脱嘌呤，但未使DNA骨架断裂；其次热碱处理可使DNA变性，促进继发的DNA溶解；zui后，热盐溶液使DNA骨架断开并使碎片溶解进入溶液中。因此，zui终以Giemsa染料显示出DNA的不同分布。在优良的C带标本中，常染色质只呈现中期染色体的一般外貌，结构异染色质区着色很深。C带在检查1、9、16特别是Y染色体的异质区时尤为重要。
实验材料    染色体标本
试剂、试剂盒    HClBa（OH）2SSCGiemsa染色液
仪器、耗材    恒温水浴箱染色缸显微镜
实验步骤    
一、用品和试剂
0.2N HCl，5% Ba（OH）2，2×SSC，Giemsa染色液。恒温水浴箱，染色缸。其余同外周血染色体制备。
 
二、操作步骤 

基本方案
 
1.   酸处理：常规制作的染色体标本（未染色）置0.2 N HCl（室温）处理15-30分钟。水洗。
 
2.   碱处理：浸入已预温至56℃的5% Ba（OH）2水溶液10分钟。水洗。
 
3.   热盐处理：置2×SSC溶液（67℃）处理60-90分钟。水洗。
 
4.   染色：l∶10 Giemsa染色液染色10-5分钟。水洗。气干。
 
5.   镜检。

替代方案：
 
1.   酸处理：常规制作的染色体标本（未染色）置0.2 N HCl（室温）处理60分钟。水洗。
 
2.   碱处理：浸入1% Ba（OH）2水溶液（50℃）中15-20秒。水洗。
 
3.   热盐处理：置2×SSC溶液（60℃）90分钟。水洗三次。
 
4.   染色：l∶10 Giemsa染色液染色10分钟。水洗。气干。
 
5.   镜检。