脉冲场凝胶电泳实验

【资料简介】

实验材料    DNA
试剂、试剂盒    GTBETBE琼脂糖
仪器、耗材    电泳仪
实验步骤    
1.  制备用于水平电泳的1%琼脂糖凝胶，放入电泳装置，其上覆盖以2~3 mm 的GTBE或TBE缓冲液。
 
2.  加入液体样品。装好蠕动泵用于电泳缓冲液循环。

3.  对于微型凝胶调整循环速度至5~10ml/min 对于大型凝胶则用20~50 ml/min。

4.  将管端与凝胶槽中的再循环口相连，或直接放入缓冲液槽。
 
5.  将可编程的转换装置与恒压直流电源相连，然后将凝胶装置与转换装置相连（见下表），开始电泳直到溴酚蓝迁移1 cm，开启转换装置及蠕动泵。
 
6.  与标准的琼脂糖凝胶一样进行溴化乙锭染色及照相。经酸处理使DNA脱嘌呤后，凝胶可进行Southern杂交。

 

 
（1）这些公式假定使用0.5×TBE缓冲液；对于GTBE和TAE缓冲液，分离的片段将稍大，并且电泳速度分别要快约20%和30%。
 
（2）变量：T，温度（℃）；V，电场通度（V/cm）；A，琼脂糖百分浓度（对于脉冲场级琼脂糖乘以0.8）；脉冲时间（对于倒转电场凝胶指反向时间，单位s）；R，正向与反向电泳时问比率；θ，改向角度。

（3）倒转电场凝胶不能分离此范围以外的长度，变角度凝胶可以分离此范围以外的片段，且效果不是很好。