细胞样本的前处理

【资料简介】

一、匀浆介质

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。

二、细胞样本的前处理:

1、细胞沉淀的收集：

① 悬浮细胞: 对于悬浮培养的细胞，直接通过离心收集细胞沉淀，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。

② 贴壁细胞: 对于贴壁培养的细胞，用*将细胞消化下来，或用细胞刮将细胞刮下来，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。

我们一般建议客户，细胞密度不要小于一百万个/ml。

2、细胞沉淀的洗涤：

在细胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS （等渗）， 轻轻颠倒混匀，将培养液在室温条件下1000转/分,离心10分钟，弃上清留细胞沉淀。

重复上述操作反复洗涤1～2次。

3、匀浆的方式：手工匀浆，超声破碎,裂解液裂解,反复冻融。

① 手工匀浆：在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，用移液器将细胞悬浮液移至玻璃匀浆管中（2ml玻璃匀浆管），将玻璃匀浆管置于冰水混合物中，手动匀浆3分钟，然后取破碎好的细胞悬浮液进行测定。

② 超声破碎:

在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，在冰水浴条件下进行如下操作:

     a、用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用400安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。

      b、用超声细胞破碎仪，300W功率，每次超声3～5秒，间隔30秒，重复4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,这三种去垢剂的作用是不同的，或者说作用力量强弱不同。

1、SDS属于离子型去垢剂，zui厉害，基本可以把细胞*破掉，DNA会释放出来，裂解液变得很粘稠。

2、NP-40是很温和的去垢剂，1%浓度的基本可以破坏掉胞膜，而对核膜破坏的作用弱，结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间，偏向于NP40，也是常用的细胞裂解液成分之一，在保护蛋白活性方面有一定作用（SDS基本会使蛋白变性失活）。

去垢剂属性只是一方面，buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素

由于很多裂解液都是蛋白变性剂,对酶活力的测定有一定的影响,一般不*用裂解液进行裂解。

④ 反复冻融:

在细胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根据所测指标的不同而有所改变，一般加入0.5ml，细胞密度不小于一百万个/ml），混匀，将细胞悬浮于PBS中，放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右）。

                由于反复冻融对酶活力影响较大,一般不*使用

产品：

吴茱萸次碱标准品,cas:84-26-4对照品

20(s)-原人参三醇标准品,cas:34080-08-5对照品

盐酸*对照品/标准品

蛇床子对照品/标准品

白果内酯标准品/对照品

*标准品/对照品

马鞭草标准品/对照品

CAS:98243-57-3,湖贝甲素标准品/对照品

CAS:25956-17-6,诱惑红标准品/对照品价格

*标准品/对照品

*标准品/对照品

葶苈子(播娘蒿)标准品/对照品

去甲蟛蜞菊内酯标准品,cas:6468-55-9对照品

噻草隆标准品|对照品,cas:1929-88-0

CAS:486-66-8,大豆苷元标准品/对照品

阿里红标准品/对照品

甲基丁子香酚标准品,cas:93-15-2对照品

*标准品/对照品

*对照品/标准品

染料木苷标准品/对照品

CAS:25127-29-1,克班宁标准品/对照品

东莨菪内酯对照品/标准品

盐酸水苏碱对照品/标准品

CAS:1491-41-4,驱虫膦标准品/对照品价格

肉叶芸香碱标准品,cas:442-51-3对照品

*对照品/标准品

*标准品/对照品

*对照品/标准品

*对照品/标准品

茵陈(滨蒿)对照品/标准品

岩藻甾醇标准品,cas:17605-67-3对照品

*杂质对照品/标准品

*对照品/标准品

蛇床子素对照品/标准品

绿原酸标准品,cas:327-97-9对照品

满山白对照品/标准品

CAS:522-97-4,四氢小檗碱标准品/对照品

6-姜辣素对照品/标准品

6-巯基嘌呤标准品/对照品

CAS:75239-63-3,麦冬二氢高异黄酮A标准品/对照品

去亚甲基小檗碱标准品,cas:25459-91-0对照品

虫螨磷标准品|对照品,cas:60238-56-4

CAS:15862-07-4,2,4,5-三氯联苯标准品/对照品价格

土荆芥标准品/对照品

7-乙基-10-羟基*标准品,cas:86639-52-3对照品

黄柏碱标准品/对照品

乌贼墨标准品/对照品

*标准品/对照品

灭草呋喃标准品|对照品,cas:26225-79-6

吡嘧磺隆标准品|对照品,cas:98389-04-9

*混合物对照品/标准品

CAS:78763-58-3,去芹糖桔梗皂苷 D标准品/对照品

*对照品/标准品

乙羧氟草醚标准品|对照品,cas:77501-90-7

5-｛4-［2-（5-乙基-2-吡啶基）乙氧基］苯基亚甲基｝-2，4-噻唑二酮(盐酸*杂质)对照品/标准品

石见穿标准品/对照品

CAS:84954-92-7,洛塞维标准品/对照品

CAS:52756-25-9,麦草氟甲酯标准品/对照品价格

苯并(b)荧蒽标准品|对照品,cas:205-99-2

三白草酮对照品/标准品

桑皮苷C标准品,cas:102841-43-0对照品

香薷对照品/标准品

白果内酯对照品/标准品

双氯*标准品|对照品,cas:343-55-5

*标准品/对照品

CAS:34681-10-2,丁酮威标准品/对照品价格

镓标准溶液,cas:7440-55-3

*标准品/对照品

盐酸吐根酚碱标准品,cas:5853-29-2对照品

*标准品/对照品

盐酸*标准品/对照品

滇桂艾纳香标准品/对照品

磷酸根标准溶液

CAS:68786-66-3,三氯苯达唑标准品/对照品价格

*对照品/标准品

耐斯糖对照品/标准品

十七碳酸甲酯对照品/标准品

反式－九氯标准品|对照品,cas:39765-80-5

间氨基酚标准品/对照品

菜蓟苦素标准品,cas:35730-78-0对照品

3,4-二甲酚标准溶液,cas:95-65-8

*E标准品,cas:18444-66-1对照品

土荆皮乙酸对照品/标准品

CAS:127191-86-0,马兜铃内酰胺 A标准品/对照品

白术对照品/标准品

(K,Na)多元素混合标准溶液（混标）标准品|对照品

*对照品/标准品

CAS:124961-61-1,多被银莲花皂苷R8标准品/对照品

*对照品/标准品

L-*对照品/标准品

异泽兰黄素标准品,cas:22368-21-4对照品

亚硫酸氢钠甲萘醌标准品|对照品,cas:130-37-0

阿洛西林对照品/标准品

*对照品/标准品

芥子苷单水合物标准品,cas:64550-88-5对照品

槲皮素标准品,cas:6151-25-3对照品

炔草酯标准品|对照品

CAS:93675-88-8,连翘酯苷E标准品/对照品

CAS:144-80-9,*标准品/对照品价格

香蜂草苷标准品,cas:14259-47-3对照品