人肺炎支原体 （MP）Elisa定性检测试剂盒

【资料简介】

本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关 液体样本中肺炎支原体 (MP)水平。

 

实验原理：

 

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中人肺炎支原体 (MP)。用纯化 的人肺炎支原体(MP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中肺炎支原体 (MP)相结合， 经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的肺炎支原体 (MP)抗体结合，形成抗 体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转 化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中人肺炎支原体 (MP)的存在与否。

 

试剂盒组成：

 

试剂盒组成	48 孔配置	96 孔配置	保存
说明书	1 份	1 份
封板膜	2 片（48）	2 片（96）
密封袋	1 个	1 个
酶标包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
阴性对照	0.5ml×1 瓶	0.5ml×1 瓶	2-8℃保存
阳性对照	0.5ml×1 瓶	0.5ml×1 瓶	2-8℃保存
酶标试剂	3 ml×1 瓶	6 ml×1 瓶	2-8℃保存
样品稀释液	3 ml×1 瓶	6 ml×1 瓶	2-8℃保存
显色剂 A 液	3 ml×1 瓶	6 ml×1 瓶	2-8℃保存
显色剂 B 液	3 ml×1 瓶	6 ml×1 瓶	2-8℃保存
终止液	3ml×1 瓶	6ml×1 瓶	2-8℃保存
浓缩洗涤液	（20ml×20 倍）×1 瓶	（20ml×30 倍）×1 瓶	2-8℃保存

 

样本处理及要求：

 

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

 

1. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。

 

1. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

 

1. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞 浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分

 

钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

 

1. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。

 

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

 

1. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

 

操作步骤：

 

1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

 

1. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀，

 

1. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

 

1. 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用

 

1. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
2. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

 

1. 温育：操作同 3。

 

1. 洗涤：操作同 5。

 

1. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

 

15 分钟

 

1. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

 

1. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

 

结果判定：

 

试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15 阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为肺炎支原体 (MP)阴性 阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为肺炎支原体 (MP)阳性

注意事项

 

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

 

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

 

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

 

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

 

5．底物请避光保存。

 

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

 

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须 注意安全。

保存条件及有效期

 

1．试剂盒保存：2-8℃。

 

2．有效期：6 个月