该试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物

【资料简介】

ABCG2
该试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）为基础，可用于检测乳腺癌组织
ABCG2抗原。该试剂盒
灵敏度高、特异性强、定性定位    、背景清晰。在所用的ABCG2一抗与相应靶
，用生物化二抗与一抗特异性    ，zui后加   HRP-SA，形成抗原—
抗原
特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。 
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（选用） 
试剂B 封闭
试剂C （*分装）已稀释的即用型ABCG2一抗（2.5ml） 
试剂D （*分装）生物素化       IgG 1支 
（浓度1.5 mg/mL，稀释     1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml 
（封闭用） 20 mL 
试剂E HRP-SA复合物1支（浓度1 μM，稀释     1:50~1:200）100 μL 
试剂F DAB显色液 5ml 
ABCG2用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）三1.21g 7.6g 
加蒸馏  800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，zui后定容至1000mL 
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积  ） 
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液） 
10mM pH6.0 柠檬酸
柠檬酸0.38g 
柠檬酸三钠2.45g 
加蒸馏  900mL，浓盐酸调pH值至6.0，zui后定容至1000mL 
或：0.5M EDTA修复液（pH8.0） 
EDTA·2H2O 186.1g 
柠檬酸三钠2.45g 
加蒸馏  700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，zui后定容至1000Ml 
3. 10 mL 
4. Tween 20 5 mL 
石蜡包埋组织切片
ABCG2实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度 
1.烤片： 将待做切片
，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr； 
3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
2.脱蜡： 切片放
10 min； 
3.    ： 切片经下行酒精    ，无
乙醇2 min；75%乙醇2min，自来
5min，95%乙醇2次（每次2min），85%
，ddH2O洗2×2min； 
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然    ，自来
2min，TBS洗涤（2×2min）（
5步封闭。 
5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min； 
，ddH2O洗2×
1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜； 
7.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）； 
8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育
30 min； 
10.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）； 
11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min； 
12.加HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），
37℃湿盒中孵育30 min； 
13.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min），TBS洗涤（2×5 min）； 
14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色； 
15.复染：自来
，复染，脱，透明； 
16.封片： 待组织标本干后，用试剂
17.观察成像： 显微镜下观察成像。 
封片； 
ABCG2注意事项：
1. 修复后，自来，骤 
2. 用过的柠檬酸用。 
3. 若试剂为微量浓 ，用前应低速离心，将。
4. 封片前一定要换用TBS，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会
影响。 
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。 
附1：抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸
9.0）等等。 
（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或
，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育，将脱蜡
一、酶消化修复法切片脱蜡，TBS20~30min后TBS
二、微波抗原修复法
微波盒中加切片架上，放，中档或
10~15min，取出微波盒，自来，取出切片。
因不同微波炉微波处理时间存在差异，
须自行调整。 
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至    ，将组织切片，修复液然
，盖上锅盖，待喷
1.5~2.5min即可脱离热源，自，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔
不锈钢高压锅中加自来腾，将切片放
，微波盒中加，待喷4~8 min即可，自然，取出切片。
此方法适用于较难检测或核抗原的修复。