谷氨酸（glutamic acid）含量测定试剂盒

【资料简介】

谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒说明书分光光度法 50 管/48 样 
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 
测定意义： 
Gu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20 种氨基酸之一，
而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu还是
味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。 
测定原理： 
利用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在 570nm 下进行测定。 
谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒需自备的仪器和用品： 
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。 
试剂的组成和配制： 
试剂一：液体100mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂二：粉剂×1 瓶，  4℃保存；临用前加入 10mL 蒸馏水，充分混匀溶解，用不完的试剂
仍  4℃保存。 
谷氨酸提取：  
1、细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞
数量（104
个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 1000 万细菌或细胞加入
2mL 试剂一） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重
复 30 次）；8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。 
2、组织样品：按照组织质量（g） ：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g组
织，加入 2mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。 
3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL） ：试剂一体积
(mL)为 1：5~10 的比例（建议取 0.2mL 血清（浆）或者细胞培养液加入 2mL 试剂一） ，进
行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。 
 
测定步骤 
1、 分光光度计预热 30min以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。 
2、 在有盖 EP管中加入下列试剂： 
试剂名称（μL）  测定管  对照管 
样本  1000   
试剂一    1000 
试剂二  200  200 
混匀，90℃水浴20min（盖紧，以防止水分散失） ，流水冷却，于570nm波长处比色，△A=A
测定管-A 对照管。对照管只要做一管。 
注意事项： 
为提高检测灵敏度，测定管的吸光值应小于 1，若大于1 则需要将上清液用试剂一稀释至适
当倍数后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。  
 
谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒 
谷氨酸含量计算： 
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0328x- 2.423；  x为谷氨酸含量（µg/mL），y为吸光值。  
2、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算 
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2）=304.9×(△A+2.423) 
3、按照蛋白浓度计算 
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr 
4、按照样本质量计算 
谷氨酸含量(µg/g鲜重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W 
5、按照细菌或细胞密度计算 
谷氨酸含量(μg/104
 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423) 
V1：加入反应体系中样本体积，1mL；V2：加入提取液体积，2 mL；V3：加入血清（浆）
或细胞培养液体积，0.2 mL；  Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：
细菌或细胞总数，1000万。 
注意：该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定，检测下限为70µg/mL。 

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