一步法黑色素细胞抗体试剂盒检测说明书

【资料简介】

人黑色素细胞抗体（MC Ab）试剂盒（ELISA）

 

使用说明书 货号: SU-B10307

 

l  本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样 本中人黑色素细胞抗体（MC Ab）的含量。

l  有效期：6个月

 

l  保存条件：2-8℃

 

 

 

 

实验原理

试剂盒采用一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人黑色素细胞抗体（MC Ab）捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并* 洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终 的黄色。颜色的深浅和样品中的人黑色素细胞抗体（MC Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm 波

长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

 

 

 

样本处理及要求

1.    血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测， 或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.    血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟， 或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.    细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃ 或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

需要而未提供的试剂和器材

 

1.    酶标仪（450nm）

2.    高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.    37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

 

试剂盒组成

 

名称	96 孔配置	48 孔配置	备注
微孔酶标板	8 孔×12 条	8 孔×6 条	无
标准品	0.3mL*6 管	0.3mL*6 管	无
样本稀释液	6mL	3mL	无
检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
底物 A	6mL	3mL	无
底物 B	6mL	3mL	无
终止液	6mL	3mL	无
封板膜	2 张	2 张	无
说明书	1 份	1 份	无
自封袋	1 个	1 个	无

备注：

1.    标准品浓度依次为：240、120、60、30、15、7.5 U/mL

2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中 直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过zui大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本 进行适当稀释后再进行实验。

 

注意事项

1.    严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室 温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2.    洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中 不要让微孔干燥掉。

3.    消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。

4.    底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5.    避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6.    在储存和温育时避免强光直接照射。

7.    平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8.    任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏 试剂盒中反应试剂的生物活性。

 

9.    不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

 

 

试剂准备

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

 

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

 

 

 

操作步骤

1.    从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2.    设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3.    样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。

4.    除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体

100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5.    弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸 上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6.    每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7.    每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

 

 

 

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘

制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

 

 

试剂盒性能

 

1.   检测范围：7.5 U/mL – 240 U/mL。

2.   灵敏度：zui低检测浓度小于 1.0 U/mL。

3.   特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.   重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。