SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒说明书

【资料简介】

For Research Use Only

 

仅供研究用

  EnoGene™ SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒

 

（EnoGene™ SDS-PAGE Gel Preparation Kit）

 

 

LOT:QY-AB1140

 

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒

一、产品介绍

 

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒提供了配制 SDS-PAGE 凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制

 

PAGE 胶了。SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制 SDS-PAGE 凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE 凝胶。本试剂盒约可配制 10-50 块常规大小的 PAGE 胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

二、试剂盒组份

 

组	份	E1WP302	储存
30% Acr-Bis（29：1）		100 mL	4℃
1M Tris-HCl, pH8.8		100 mL	4℃
1M Tris-HCl, pH6.8		25 mL	4℃
10% SDS		5mL	4℃
Ammonium Persulfate(过硫酸铵)		1g	4℃
TEMED		0.5mL	4℃

 

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

 

可调移液器、垂直板电泳仪、双蒸水

 

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒四、操作步骤

 

1、 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：不同浓度的SDS-PAGE分离胶的分离范围：

 

SDS-PAGE 分离胶浓度	分离范围
6%胶	50-150kD
8%胶	30-90kD
10%胶	20-80kD
12%胶	12-60kD
15%胶	20kD 以下

 

2、按照下面的配方进行配制（总体积为15ml），如有体积变动可按比例进行放大或缩小。过硫酸铵配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解），分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。

注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。

 

贮液（ml）	分离胶中丙烯酰胺的终浓度（%）
	6	8	10	12	15
蒸馏水	6.0	5.0	4.0	3.0	1.5
30% Acr-Bis（29：1）	3.0	4.0	5.0	6.0	7.5
1M Tris-HCl, pH8.8	5.7	5.7	5.7	5.7	5.7
10% SDS	0.15	0.15	0.15	0.15	0.15
10%的过硫酸铵	0.15	0.15	0.15	0.15	0.15
TEMED	0.01	0.01	0.01	0.01	0.01

 

For Research Use Only

 

仅供研究用

 

 

3、 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：

 

成分	配制不同体积 SDS-PAGE 浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶	2	3	4	6	8	10
蒸馏水	1.4	2.1	2.7	4.1	5.5	6.8
30% Acr-Bis（29：1）	0.33	0.5	0.67	1.0	1.3	1.7
1M Tris-HCl, pH6.8	0.25	0.38	0.5	0.75	1.0	1.25
10% SDS	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
10%的过硫酸铵	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
TEMED	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

 

五、注意事项：

 

1、所过硫酸铵配制成10%溶液后，应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。

 

2、 TEMED宜避光保存。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节TEMED的用量，控制在不同的室

 

内环境下凝胶凝聚的速度。

 

3、请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

4、

 

六、保存条件：

 

1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS、Ammonnium persulfate (过硫酸铵) 粉末和1M Tris-HCl, pH6.8室温或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)和TEMED 4℃避光保存。

 

过硫酸铵配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解，1g中9ml蒸馏水溶解），分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。