脂肪酸合成酶（FAS）活性试剂盒详细说明

【资料简介】

脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书 
                                                分光光度法   50管/48样 
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 
测定意义： 
FAS 是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生成长链脂肪酸。FAS 普遍
表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和以及脂肪组织中表达丰富。 
测定原理： 
FAS 催化乙酰CoA、丙二酰 CoA和NADPH生成长链脂肪酸和 NADP+
；NADPH在 340nm
有吸收峰，而NADP+
没有；通过测定340nm  光吸收下降速率，计算 FAS 活性。 
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书 自备仪器和用品： 
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。 
试剂组成和配制： 
试剂一：液体×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于 4℃充分解冻后混匀。 
试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入1100 μL试剂四，充分溶解。 
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入1100 μL试剂四，充分溶解。 
试剂四：液体×1瓶, 4℃保存。 
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入 2100μL试剂四，充分溶解。 
粗酶液提取： 
1.  组织：按照组织质量（g） ：试剂一体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织，
加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。 
2.  细菌、真菌：按照细胞数量（104
个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议500万细胞加入 1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7
秒，总时间3min）；然后 16000rpm，4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。 
3.  血清等液体：直接测定。 
FAS测定操作： 
1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 
2. 试剂四置于40℃水浴中预热 30 min。 
3. 空白管：在 1mL石英比色皿中依次加入 100μL蒸馏水、 20μL试剂二、 20μL试剂三、 820μL
试剂四和40μL试剂五，迅速混匀后于 340nm处测定吸光值，记录第 30s和 90s时吸光值，
分别记录为A1和A2。△A 空=A1-A2。 
4. 测定管：在 1mL石英比色皿中依次加入 100μL上清液、 20μL试剂二、 20μL试剂三、 820μL
试剂四和40μL试剂五，迅速混匀后于 340nm处测定吸光值，记录第 30s和 90s时吸光值，
分别记录为A1和A2。△A 测=A3-A4。 
注意：空白管只需测定一次。 
FAS活性计算公式： 
（1）按照蛋白浓度计算 
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADPH  为1个酶活单位。 
FAS(μmol/min/mg prot) =[(△A测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V反总×106
] ÷(Cpr×V样)÷T 
=1.61×(△A测定管–△A 空白管) ÷Cpr 
（2）按照样本质量计算 
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADPH 为1 个酶活单位。 
FAS(μmol/min/g) =[(△A测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V反总×106
] ÷(W×V 样÷V样总)÷T  
=1.61×(△A测定管–△A 空白管) ÷W 
（3）按细胞数量计算 
活性单位定义：37℃中每104
个细胞每分钟氧化1μmol NADPH  为1 个酶活单位。 
FAS(μmol/min/104
cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106
] ÷(细胞数量×V样÷V样
总)÷T 
=1.61×(△A测定管–△A 空白管) ÷细胞数量 
（4）按液体体积计算 
活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1μmol NADPH  为1个酶活单位。 
FAS(μmol/min/mL) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V 反总×106
] ÷V 样÷T 
=1.61×(△A测定管–△A 空白管)   
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103
/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总
体积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V 样：加入
反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。 
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书 注意事项： 
1.  上清液蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。 
2.  配制好的试剂4℃保存，三天内使用完毕。 
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