上海信帆生物科技有限公司作者
α-葡萄糖苷酶(α-GC)试剂盒说明书
资料类型 | jpg文件 | 资料大小 | 35778 |
下载次数 | 40 | 资料图片 | 【点击查看】 |
上 传 人 | 上海信帆生物科技有限公司 | 需要积分 | 0 |
关 键 词 | α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase, α-GC)试剂盒说明书,α-GC,α-葡萄糖苷酶,α- |
- 【资料简介】
α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase, α-GC)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取2-3 个预期差异的样本做预测定
测定意义:
α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖
基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些
信号分子产生密切相关。
测定原理:
α-GC 分解对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm 有zui大吸收峰,通
过测定吸光值升高速率来计算α-GC 活性。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸
馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入10mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的
试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体50mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提
取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);
15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,
加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称(μL) 测定管 对照管
试剂一 400
试剂二 500 500
样本 100 100
充分混匀,放入37℃准确水浴30min 后,立即放入95℃水浴5min(盖紧,以防止
水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)
试剂一 400
充分混匀,8000g,4℃,离心5min,取上清液
上清液 500 500
试剂三 1000 1000
充分混匀,室温静置2min 后, 400nm 处测定吸光值A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每
个测定管需设一个对照管。
α-GC 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为y =0.00543x -0.0027;x 为标准品浓度(nmol/mL),y 为吸光
值。
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg 组织蛋白每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
需要另外测定,建议使用本公司BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g 组织每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力(nmol/min /g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1 万个细菌或细胞每分钟产生1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-GC 活力(nmol/min /104 cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T
=0.123×(ΔA +0.0027)
V 反总:反应体系总体积,1mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V 样总:加入
提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 500:细胞或细菌
总数,500 万;T:反应时间,30min。
上一篇:橡塑具有安装简易,快捷的优点
下一篇:橡塑发泡保温板的六个优点
- 凡本网注明"来源:环保在线"的所有作品,版权均属于环保在线,转载请必须注明环保在线,https://www.hbzhan.com。违反者本网将追究相关法律责任。
- 企业发布的公司新闻、技术文章、资料下载等内容,如涉及侵权、违规遭投诉的,一律由发布企业自行承担责任,本网有权删除内容并追溯责任。
- 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。